MonoSpin™系列 / 生物样品前处理离心小柱 |
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MonoSpin™系列 / 生物样品前处理离心小柱
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应用
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■微量样品纯化富集
GL Sciences开发的整体型硅胶具有低压力，通液性好，低死体积等特点而成为微量样品纯化富集的最佳选择之一，MonoSpin系列离心小柱无需蒸发或者浓缩处理即可实现小体积样品纯化富集效率的提高。 ■采用 MonoSpin® C18 净化尿液中的苯丙胺 分析条件： ● 色谱柱: InertSustainSwift C18 (3 μm, ×1520.1 mm I.D.) ● 流动相: A) 10 mM 醋酸铵 –甲酸 (pH 3.3) B) CH3OH A/B = 90/10 - 2 min - 90/10 - 13 min - 70/30,v/v ● 流速: 0.3 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 检测器: LC/MS ● 样品: 1. 盐酸麻黄素 2. 麻黄素 3. 甲基麻黄碱 4. 苯丙胺 5. 甲基苯病 6. 3,4-甲撑二氧苯丙胺 7. 3,4-甲烯二氧甲苯丙胺 ■采用MonoSpin®C18 净化血浆中的药物采用 MonoSpin® C18净化血浆中的小分子药物，考察连续三天实验的重现性(n=10 )。 采用MonoSpin C18离心小柱净化血浆中小分子药物不仅表现出较好的重现性和回收率，同时离心操作显示出很高的净化效率。 常规小柱 样品 Con. (ng/mL) 回收率 (%) RSD (%) Sample Con. (ng/mL) 回收率 (%) RSD (%) 样品 Con. (ng/mL) 回收率 (%) RSD (%) 地昔帕明 5 91.2 4.8 帕罗西汀 5 83.7 3.9 阿米替林 5 83.7 7.0 10 86.1 3.3 10 84.1 7.8 10 81.8 2.8 50 85.2 5.9 50 83.9 8.2 50 83.8 3.0 250 88.4 6.5 250 86.7 7.5 250 88.4 2.7 丙咪嗪 5 96.3 9.5 马普替林 5 85.7 8.1 舒必利 5 97.9 9.0 10 95.8 1.5 10 84.7 3.2 10 95.5 8.5 50 94.5 0.9 50 88.6 5.4 50 90.8 2.6 250 95.9 0.9 250 87.5 7.7 250 92.6 3.0 氟伏沙明 5 96.8 11.6 度洛西汀 5 106.3 9.9 - - - - 10 87.1 5.0 10 104.8 6.7 - - - 50 86.8 8.1 50 99.8 8.7 - - - 250 87.5 9.7 250 99.8 6.0 - - - ■MonoSpin® C18可以用于蛋白酶解样品脱盐！MonoSpin® C18 可以高效去除胰蛋白酶解样品中的蛋白变性剂和盐！ 分析条件： ● 色谱柱: ：Inertsil ODS-3 (3 μm, 150× 2.1 mm I.D.) ● 流动相: A) H2O (0.1 % TFA) B) 乙腈 (0.1 % TFA) A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 ● 检测: UV 210 nm ● 流速: 0.2 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 样品: BSA酶解样品 2 μL ■采用 MonoSpin®C18净化血浆样品重点的荷尔蒙 分析条件： ● 色谱柱: InertSustain C18 ( 2 μm, 50 ×2.1 mm I.D.) ● 流动相: A）0.1 % TFA in H2O B）0.1 % TFA 乙腈 A/B = 85/15 –5 min –50/50 －2 min－50/50 ● 流速: 200 μL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 检测: UV 210 nm ● 进样量: :10 μL ■MonoSpin® C18 FF非常适合高粘度的样品，例如全血样品或者复杂基质样品。 MonoSpin® C18 FF 产品性能参数 通孔 20 μm 介孔 15 nm 小柱尺寸 Φ4.2 x 1.5 mm 上样体积 50 - 800 μL 洗脱体积 50 - 800 μL 离心速度 1,000 x g 最大样品负载量 50 μg( 以阿米替林计算)离心速度和样品的关系 MonoSpin® C18可以在低转速条件下提供较快的通液速度(1,000 x g).！ 条件：离心速度 1,000 ×g for 30 sec 每种溶剂通过 MonoSpin® C18 和 MonoSpin® C18 FF的速度对比. 溶剂 体积 MonoSpinn® C18* MonoSpinn® C18 FF 甲醇 500 μL ○ ○ 水 500 μL 400 μL ○ 血浆 ** 500 μL 300 μL ○* 通常, MonoSpin® C18 应该采用 2,300 x g 或更高的转速，持续时间 30 sec . ** 采用血浆样品离心后的上清液，离心速度10,000×g ，持续 1 min. ■采用MonoSpin ® C18 FF净化全血样品分析条件： ● 色谱柱: InertSustain Phenyl (3 μm, 150 ×2.1 mm I.D.) ● 流动相: 乙腈 -HCOONH4(10 mM, 0.1 % HCOOH) = 25:75 (v/v) ● 流速: 0.2 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 检测: MS(ESI) ■采用MonoSpin NH2纯化氨基吡啶(PA) 化糖 HILIC模式纯化 PA 化糖链 MonoSpin® NH2 可以同时去除残存的荧光标记试剂 分析条件： ● 色谱柱: Inertsil NH2 Column(5 μm, 250× 4.6 mm I.D.) ● 流动相: ：A) H2O/乙腈 ＝5/95 0.1 % 甲酸 B) H2O/乙腈 ＝95/5 0.1 % 甲酸 A/B = 90/10-10 min–90/10-40 min-60/40 ● 流速: 1 mL/min ● 检测: FL Em 320 nm, Ex 400 nm ● 进样量.: 1.5 μL ■采用MonoSpin ® SCX蛋白酶解产物利用MonoSpin® SCX通过阶梯式变化洗脱溶液盐浓度可以实现快速和简便的肽段分离。 每次添加一种新的洗脱盐溶液时，请更换一支新的回收管。 ① 含10% 乙腈25 mM的 H C O O N H 4 : 200 μL ②含10% 乙腈50mM的 H C O O N H4 : 200 μL ③ 含10% 乙腈100mM的 HCOONH4 : 200 μL ④ 含10% 乙腈500mM的 HCOONH4 : 200 μL ⑤ 含10% 乙腈1M 的 HCOONH4 : 200 μL 分析条件： ● 色谱柱: Inertsil ODS-3 (3 μm, 2×.1150 mm) ● 流动相: A) H2O (0.1 % HCOOH) B) 乙腈 (0.1 % HCOOH) A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 ● 检测: UV 210 nm ● 流速: 0.2 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 进样量.: 2 μL ■采用MonoSpin® CBA 纯化尿液中农药百草枯和敌草快分析条件： ● 色谱柱: Inertsil ODS-3 (5 μm, 150 mm× 4.6 mm I.D.) ● 流动相: 0.2 M phosphoric acid, 0.1 M diethyl amine, 7.5 mM IPCC08 (IPCC-0.8, Sodium 1-Octanesulfonate) /Acetonitrile=89/11 ● 流速: 1 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 检测: PDA 290 nm ● 进样量.: 50 μL ■采用 MonoSpin® Trypsin对牛血清白蛋白BSA进行快速酶解 蛋白酶解时间: 10 min 酶解温度: 室温 在蛋白质酶解之前，一定要对蛋白蛋白质进行最优的还原烷基化处理，以下是还原烷基化流程的一个示例： 分析条件： ● 色谱柱: Inertsil ODS-3 (3 μm, 150× 2.1 mm I.D.) ● 流动相: A) H2O (0.1 % HCOOH) B) Acetonitrile (0.1 % HCOOH) A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 ● 流速: UV 210 nm ● 检测: 0.2 mL/min ● 柱温: 40 ℃ ● 样品.: BSA 酶解液2 μL ■采用MonoSpin® PBA纯化血液中神经递质类物质儿茶酚胺分析条件： ● 色谱柱: Inertsil ODS-3 (5 μm, 150 mm×2.1 mm I.D.) ● 流动相: 50 mM Phosphate buffer (pH 5.6) 50 mg/L EDTA 600 mg/L IPCC-008 -10 % Methanol ● 流速: 0.3 mL/min ● 柱温: 35 ℃ ● 进样量.: 5 μL ● 检测器: ECD Pulse Mode ● 样品: 1. 去甲肾上腺素 2. 肾上腺素 3. 二羟基苯甲酸（DHBA） 4. 多巴胺 ■采用MonoSpin®TiO净化尿液中的有机磷农药 分析条件： ● 色谱柱: ODS Column (150×2.1 mmI. D.) ● 流动相: CH3OH 20 mM HCOONH4 (pH 3.0) A/B = 15/85, w/w ● 流速: 200 μL/min ● 检测: SIM ● 进样量.: 5 μL ● 样品: 1. 双丙氨磷 2. 草甘膦 3. 甲基磷酸亚基丙酸 4. 草铵膦 5. 氨甲基膦酸 ■MonoSpin ® ME应用 采用 MonoSpin® ME富集金属离子 ●整体型硅胶键合亚氨基二乙酸. ●适用于金属离子的纯化富集 ●也适用于血液中或者尿液中痕量Pb的提取和富集 ●用于去除样品中含有的无机二价金属离子也有很好的效果，从而降低样品直接进入LC/MS/MS时金属离子引起的离子抑制作用力。 Cu回收率2+ ，采用Zeeman GF-A-AF系统 注入次数 导入溶剂体积 (mL） 回收率 (%) 1 0.8 98±4 2 1.6 97±5 3 2.4 95±5 4 3.2 95±5 5 4 94±3■MonoSpin®Phospholipid 应用 特点: ●用于去除生物样品中的磷脂，操作快速简便； ●去除磷脂效率超过90%，大幅降低磷脂的离子抑制作用； ●磷脂负载量大，一次性可以去除50μL血浆样品中含有的磷脂。 去磷脂小柱保留磷脂的机理： ●整体型硅胶骨架涂布TiO2和 ZrO2； ●金属氧化物对磷酸基有选择性的金属配位性作用力，从而可以选择性保留磷脂，去除磷脂效率超过90%。 去除磷脂离心小柱操作流程 ■采用 MonoSpin® ProA and MonoSpin® ProG在5分钟时间内纯化IgG如下图所示,对CHO细胞介质中的抗体进行定量分析，电泳分离结果显示，抗体纯化效果较好。 ■采用MonoSpin® ProA富集抗体溶液采用MonoSpin ProG离心小柱富集500uL的0.025 mg/ mL IgG溶液，采用100uL缓冲液洗脱两次(En = E1 and E2)，然后测定洗脱液中IgG浓度，第一次洗脱液中（E1）IgG浓度是标准溶液浓度的50倍，说明小柱对IgG的回收率约有90%。 洗脱体积和回收率的关系 MonoSpin ® ProA 只需要100 μL 洗脱盐溶液, 对IgG的回收率至少有90%，而其他品牌产品需要400uL洗脱体积，而其他品牌产品洗脱体积需要400 μL，IgG回收率只有70%左右。 采用96孔板形式MonoSpin ProA从CHO细胞培养基介质中纯化IgG回收率和重现性数据结果 |
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